Изобретение относится к области биохимии. Описана альфа-D-галактозидаза, обладающая измененной региоспецифичностью по отношению к α1,4-связи и содержащая мутацию либо Pro402Asp, либо Phe328Ala в соответствующем положении аминокислотной последовательности исходного фермента дикого типа, выделенного из штамма Thermotoga maritima MSB8. Предложен способ получения указанной альфа-D-галактозидазы, заключающийся в том, что осуществляют выбор позиций для сайт-направленного мутагенеза аминокислотной последовательности фермента дикого типа следующим образом: а) проводят пространственное наложение активных центров ферментов, обладающих высокой гомологией их аминокислотных последовательностей и сходством трехмерных структур, и кристаллическая структура которых содержит остаток D-галактозы, на основании проведенного наложения структур устанавливают возможное расположение D-галактозы в активном центре α-галактозидазы из Thermotoga maritima MSB8, б) уточняют методами молекулярной динамики возможное расположение D-галактозы в активном центре α-галактозидазы, определяют общие аминокислотные остатки ферментативного центра, образующие водородные связи с D-галактозой, и выявляют возможные положения D-галактозы относительно пары каталитических аминокислотных остатков фермента, в) проводят in silico мутации α-галактозидазы дикого типа, при этом отбирают позиции аминокислотных остатков для сайт-направленного мутагенеза, после выбора позиций один из отобранных на этапе в) аминокислотных остатков замещают другим аминокислотным остатком, а именно либо Pro402Asp, либо Phe328Ala. Изобретение позволяет получить региоспецифичные по отношению к α1,4-связи альфа-D-галактозидазы. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 1 пр.