Пробоподготовка рекомбинационных белков для малоуглового рассеяния нейтронов

Малоугловое рассеяние нейтронов (МУРН) – эффективный метод изучения структуры различных объектов в широком диапазоне размеров и молекулярных масс. Метод МУРН применяется для определения общей структуры и формы биологических макромолекул, а также их комплексов и агрегатов.
Гомологичная рекомбинация (ГР) – фундаментальный процесс, происходящий в живой клетке. Белок RecA является центральным белком ГР. В основе модели процесса гомологической рекомбинационной репарации лежит способность пресинаптического комплекса, образованного белком RecA на определенной ДНК, катализировать in vitro гомологическое спаривание и обмен одной из нитей линейной молекулы двунитевой ДНК (днДНК) фага М13 на кольцевую однонитевую ДНК (онДНК) того же фага. Метод МУРН позволяет определять структуру и форму нуклеопротеиновых филаментов, образованных белком RecA в растворе.
Препаративные количества онДНК получали из вирусных частиц бактериофага М13, секретируемых инфицированными бактериями в окружающую среду.
Бактериальный белок RecA хроматографически очищали до гомогенности.
В рамках данной модели в перспективе возможно изучение не только прокариотических белков ГР, но и белков ГР эукариот. После оптимизации подобным методом возможно выделение не только бактериального RecA, но и его эукариотического аналога – белка Rad51 для последующего исследования геометрических параметров нуклеопротеинового филамента методом МУРН.